KUBOTA久保田8730操作及维护
 
离心机是常见的实验室设备，它可以通过高速旋转产生的离心力场对不同沉淀系数的混合物进行快速分离、浓缩和提纯。被广泛应用于生物物理、生物化学、医疗卫生、石油化工、地质、农、林、牧等科研、生产部门，它可对生物细胞、病毒、血清、蛋白等有机物，无机物溶液，悬浮液及胶体溶液、纳米材料等样品进行分离、浓缩、提取、制备等工作 [1-2]。
河南科技学院实验中心在 2006 年购进了美国贝克曼库尔特公司 J-25 落地式高速冷冻离心机和L-100K 制备型超速离心机各 1 台，设计的软件可模拟不同的分离实验，节省摸索条件的时间及宝贵的样品。无论是对于蛋白组学、基因组学还是细胞组学的研究，Beckman  Coulter  Optima  L 超速离心机都可配合不同的转头使用，集真空、高速和冷却于一体，可以用于大量的细胞、亚细胞器、细菌及病毒的快速分离，从而完成各种核酸、蛋白、细胞和纳米材料的分离工作，可满足我院动物科学、食品科学、
生命科学等相关专业实验人员的实验需求。现就仪器性能、配置、操作、应用等方面对 J-25 落地式高速冷冻离心机和 L-100K 制备型超速离心机做简单介绍，以及近年来对离心机的操作和维护经验的总结， 以便实验人员在今后教学科研实验中提高离心机使用效率，为实验室的建设和发展发挥更大作用。
KUBOTA久保田8730

1 KUBOTA8730高速冷冻离心机

1.1 主要技术指标

最大转速 / 离心力：25000r/min，75600g；最大容量：6×500mL；离心时间：0 ～ 3h 或连续离心；温度范围：-20℃～ 40℃，1℃步进；速度控制范围： 100 ～ 25000r/min 速度设定；速度控制精度：设定速度 10r/min[3]。

1.2 仪器配置

JA-25.50  定   角   转   头，25000r/min，75600g，
 
离心管 8×50mL；JA-10 定角转 头，10000r/min， 17700g，离心管 6×500mL；JS-5.9 多功能酶标板转头，5900r/min，6570g，酶标板 10plates。

1.3 操作规程

（1） 打开电源：按 POWER 开关，打开电源， 踩底部脚踏板，打开离心机仓门盖；
（2） 样品平衡：将样品倒入离心管，连同离心管盖子一起置托盘天平中左右平衡（或者用电子天平准确称量），盖好离心管盖子（离心管最好七成满， 以防太满而外溢），若样品管为奇数管可用蒸馏水作平衡管；
（3） 放置转子：安装所用型号转子，然后将配平的离心管对称放入转子的对称孔内，拧紧转子盖， 将手放于离心盖上有手掌图样的部位，双手向下用力向下压，关上离心机仓门盖；
（4） 设定离心参数：旋转 ROTOR 按钮，旋转至 JS-5.9、JA-10 或 JA-25.50，选择转子型号， 旋转 SPEED 按钮，旋转到需要的转速，按同样方法设置 TIME 和 TEMP，旋转到需要的离心时间和温度
（如：JA-25.50，12000r/min，20min，4 ℃）；其 它 键 的使用，按 RPM/RCF 键选择速度单位（RPM 表示转 / 分，RCF 表示对应的离心力 g 值）；按 TIME/ HOLD 键选择设定方式（HR：MIN，最多设定 3 小时，时间倒数计时；按 HOLD 键，持续离心，时间从 0 开始计时，直到按 STOP 键，才停止离心；按 ACCLE 键，加速快慢键；按 DECEL 键： 速快慢键；
（5） 按 START 键，开始离心，遇紧急情况可按 STOP 键停止离心机工作；
（6） 离心结束后（速度显示为 0），打开离心机仓门盖，取出样品和转子；
（7） 用干净的沙布擦干或者自然晾干离心机腔体；
（8）0.5 ～ 1h 后，关上离心机仓门盖，关闭电源；
（9）填写使用记录，管理人员签字确认后方可离开实验室。

1.4 应用范围

生物、医学、食品卫生、环境科学等领域细胞、病毒、血清及亚细胞组份分离；蛋白、脂蛋白、核酸、RNA 梯度沉淀分离；无机物溶液、悬浮液、纳米材料及胶体溶液等样品分离、浓缩、提纯等。

1.5 注意事项

（1）定期在转子管帽螺纹上涂润滑油，密封圈上涂真空脂；
（2） 装样品的离心管必须配平，对称放入转子。当离心转速达 10000-50000r/min 时，如果对称管相差 1g，转头平均半径 50mm，根据离心力公式 F=m×RCF，10000r/min 的 RCF 大约等于 6000， F=1×6000g=6kg；50000r/min 的 RCF 大 约 等 于 15000，F=1×150000g=150kg，这样就引起两边不平衡力可达 6 ～ 150kg，这对离心机的损伤是非常大的，将大大缩短离心机的使用寿命；样品配平误差过大，离心机在运转过程中将自动报警，停止运转；
（3） 安放转子的时候，转轴凹槽正对身体，转子铆钉也正对身体，双手抱住转子垂直放入转轴；转子置入离心槽，此时一定注意转子中心内孔的两个梢钉应该卡定在离心机转动轴的正确位置上，其转子和立轴直接的配合如下图 1 箭头所示；
（4） 务必拧紧转子盖，否则在高速离心过程中转子容易脱离转子轴而产生极大的安全隐患和危险；
（5） 离心过程中 ACCEL 和 DECEL 都默认为 MAX；
（6） 离心速度不能超过各离心转子的最大转速；
（7） 不同型号的转子、离心管和管套等配件， 务必严格按照不同转子说明操作使用，不能错放， 错配，以免损坏离心机；
（8） 离心完毕后，务必将腔体里面的水用干净布擦干或晾干，转子使用完毕后，必须取出；
（9）J-25 离心机专人管理，在管理员的培训和指导下操作，严禁擅自操作。
 

2 KUBOTA8730高速冷冻离心机

2.1 主要技术指标

最大转速 / 最大相对离心力 100000r/min， 802400g，转 速 精 度 为 ±20r/min；温 度 设 定  
0 ～ 40℃，1℃步进；热敏电阻和红外检测双控传感器监控温度，准确度 ±0.3℃，自动样品超温保护在 1℃以内；0 ～ 999h 或连续离心；半导体固体制冷；机械泵和油扩散泵，真空度 0.13Pa 压力以下 [4]。

2.2 仪器配置

100Ti 定角转头 100000r/min，802400g，离心管
8×6.5mL；70Ti 定 角 转 头 70000r/min，504000g，离心管 8×39mL；SW41Ti 水平转头 41000r/min， 288000g，离心管 6×13.2mL；

2.3 操作规程

（1） 按  POWER  键，打开离心机电源，预热 0.5h左右；
（2） 样品平衡：将样品用一次性注射器缓慢加入专用离心管，然后连同离心管管帽放入电子天平中准确称量，用热合器封住离心管口，盖上离心管管帽，再准确称量一遍，若样品管为奇数管可用蒸馏水作平衡管；
（3） 安装所用型号转子，对称放入离心样品的离心管，拧紧转子盖，关上离心机仓盖；
（4） 输入离心数据，编写离心程序，按SPEED 键，输入所需转速，按 ENTER 键确认，按同样方法设置 TIME 和 TEMP（如：100Ti，90000r/min，6h，4℃）；
（5） 按START 键，开始离心，当真空度抽到＜ 20
（750，200，20），离心速度达到设定转速，方可离开离心机；
（6） 速度显示为  2900r/min  后，按VACCUM键放真空，打开离心机仓盖，取出样品和  转子；
（7） 用干净的布擦干或者自然晾干离心机腔体；
（8）0.5 ～ 1h 后，关上离心机仓门盖，关闭电源；
（9）填写使用记录，管理人员签字确认后方可离开实验室。

2.4 应用范围

分子生物学、生物化学、蛋白组学、基因组学等研究中亚细胞组分，病毒、核酸、蛋白质等生物大分子的分离、浓缩、提纯；蔗糖 / 氯化铯密度梯度离心法（density  gradient  centrifugation   method） 纯 化病毒。

2.5 注意事项

（1） 离心管的样品务必配平，误差不超过体积的 1%，然后对称放入转子，离心管要对称同量、同液、满管放置，严禁半管和空管运转；
（2） 务必拧紧转子盖；
（3） 水平转子对号入座，不能错放；SW41Ti 转子 6 个吊篮必须全挂上，对号入座，轻微晃动检查是否挂好；
（4） 离心过程中 ACCEL 和 DECEL 都默认为
MAX；
（5） 离心开始离心机自动开始抽真空，离心结束后，需要按 VACCUM 键放真空；
（6） 离心速度不能超过各个转子的最大转速；
（7） 不同型号的转子、离心管和管套等配件，务必严格按照不同转子配套说明操作使用，不能错放， 错配，以免损坏离心机；
（8） 离心完毕后，务必将腔体里面的水布擦干，转子使用完毕后，必须取出；
（9）L-100K 超速离心机严格按照离心机操作规程使用，专人管理专人操作，严禁擅自操作。
（10）送样人要向操作者说明所离心的溶液是何种溶液，操作者要作详细询问记录，严禁离易燃、易爆以及易腐蚀样品。

3 日常维护

（1） 离心机不常用时，必须做到每月至少要开机一次，放一个转子低转速（3000 ～ 5000r/min）运行 30min，以保证离心机运转正常 [1，5]；
（2） 绝对不允许超过转子的最大转数、能承受的最大离心力和最大允许速度使用；不能在高速运转时使用低速度转子 [6]；转子达到使用寿命，必须降级或减速使用 [1]；
（3） 绝对不允许不平衡运行离心机。样品务必在离心管重量平衡后对称放入转子内，否则在非对称的情况下负载运行，就会使轴承产生离心偏差，引起离心机剧烈振动，严重的会使离心机转轴断裂。在超速离心使用 SW41 水平转子时，离心管务必要求对号入座，平衡后务必按对应的号码对称放入离心管，一定要检查 6 支离心管是否挂牢；离心管也专机使用，不能混用，否则会损伤转头；
（4） JA-10 转头在使用离心管套时，必须全部装入转子内。平衡时应带上管套，离心管套专机使用， 不能在不同型号离心机之间混用；
（5） 离心时将离心腔门或盖子关好以及把转子盖子拧紧，离心完毕后，必须将转头取出，擦拭或者清洗干净，放置在干燥通风的地方晾干，擦干或者自然晾干离心机腔体，关好离心机盖；
（6）L-100K 超速离心机开机后，转速还未达到预置转速时，操作者不要离开离心机，直到运转正常方可离开，要随时观察运行情况；
（7） 要定期给 L-100K 超速离心机真空泵、扩散泵换油，使真空系统正常运行；
（8） 定期给离心转轴涂抹润滑脂，密封圈上涂真空脂，磨损过度的垫圈立即更换。离心机腔体盖边缘涂抹真空脂，防止密封圈老化，应定期检查有无变形；
（9） 定期检查 L-100K 超速离心机转子底部识别转速的花盘是否有损伤和划痕，如果在安装的过程中有损伤和划痕，就会出现转数上不去的现象， 就需要及时更换花盘。
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